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「分享」CAR-T细胞治疗肿瘤项目生物样本管理经验

来自:思途器械CRO    发布时间:2022-08-01    浏览 :

 

  大家好,我是WJ,今天,我想跟大家分享我认为细胞治疗肿瘤项目中比较困难的一个点:生物样本的管理;希望对大家有用~

  我所做的CAR-T项目生物样本检测种类很多,大致按样本类型归为骨髓活检样本、骨髓样、血样、尿样四类。

  样本类型

样本类型 样本类型1 样本类型2 样本类型3 样本类型4 样本类型5
骨髓液 MRD Fish      
骨髓组织 活检 免疫组化      
血样 RCL/VCN/NGS 免疫球蛋白 IL-6 外周血CarT细胞数量 疗效评估指标
尿样 疗效评估指标        

  骨髓液-MRD采样注意:

  1.骨髓液24小时内需寄送至中心实验室。一般在比快递预约时间提前约一个小时准备开始采集,采集完成后立刻寄送,无需将样本静置、超低温保存等处理。

  2.安排好各随访检测,PET-CT和骨髓穿刺同一天时,不可以先做PET-CT。其次,做完骨髓穿刺,受试者手术伤口疼,会影响日常活动,如果有需要到门诊去做的检查,可以提前或者延后预约,时间尽量错开半日以上。

  3.各时期检查随着随访计划表是有不同安排的,一般MRD 项目要求单管采集4ml骨髓液,但在某些患者身上,骨髓液粘稠,可呈棉絮状,研究者通过注射器抽吸的方法,无法满足采集量。CRC应该协助研究者在生物样本记录表内明确登记采集样本量,同时沟通项目组以寻求指导。

  结果一般3-4个工作日内通过中心实验室网站可查询。

  骨髓液-FISH:一般在筛选制备前,会收集FISH的骨髓样本,作为一项重要的试验数据,一般是和MRD同批次寄送到指定外地中心实验室。

  骨髓组织活检:受试者髂骨穿刺,取出活的组织。按照方案要求进行,通常患者做完骨髓穿刺需要避免伤口处的发炎和感染,不能沾水。有时骨髓活检是十分频繁的,当研究者认为疗效评估良好,受试者无异常主诉及症状,考虑到局部感染的风险,以及手术带给受试者的痛苦,会考虑跳过某次随访的骨髓活检。前提是我们协助和项目组/申办方沟通明确这样是否可行,保留沟通邮件,将讨论的结果整理交给研究者做保存记录。

  活检样本一般送至本地中心实验室。纸质报告在5个工作日左右可去病理科取得。

  骨髓组织-免疫组化:通过化学反应使标记抗体的显色剂(荧光素、酶、金属离子、同位素)显色来确定组织细胞内抗原(多肽和蛋白质),对其进行定位、定性及相对定量的一种方法,送检至本中心实验室,一般只需要前期提供的骨髓样本即可。

  免疫组化结果会在骨髓活检完成后申请免疫组化的7个工作日之内在LIS系统查到或去病理科取得,其报告和骨髓活检出在一张检查单上,结果分为:

  -(阴性)、个别+(个别阳性)、+(阳性),提示检测分子是否存在于受试者骨髓组织的细胞内。

  血样:在以中心实验室手册要求为准的原则下,我分享一些个人经验

  全血/血浆:随访血样应在同一天同一时段采集完成,采样管和分装管主管同时在24小时内寄走。

  血样-RCL/VCN/NGS:评估CAR-T安全性指标。一般要求超低温(负60度甚至负80度)保存,寄送外地中心实验室。

  需要注意的是:一定仔细阅读随访计划表的备注对于RCL/VCN/NGS的要求,依照方案备注要求,主要随访期每次必测RCL与NGS,VCN按照方案备注内容无需每次都测。

  RCL原理:CAR-T的生产中常用慢病毒载体将CAR基因导入T细胞中。尽管慢病毒载体具有复制缺陷,但如果在慢病毒生产过程中发生穿梭质粒、包装质粒和T细胞之间或慢病毒载体与T细胞的内源性逆转录元件之间重组,则可能导致复制型慢病毒(RCL)的潜在风险。

  外周血CAR-T细胞数量:了解CAR-T在体内复制数量的情况。样本要求低温(2-8度)保存。24小时内寄送。

  IL-6(白介素6):监测体内炎症的一项指标,代表CarT细胞和肿瘤细胞的斗争强弱,该值升高需警惕CRS反应,通常在回输开始前后测定,发热受试者通常伴随IL-6指标升高,IL-6恢复正常则发热停止,强烈的炎症反应可能会造成机体负担过重从而导致受试者出现SAE,这也意味着回输回输期间需要密切观察受试者的情况。样本要求低温(2-8度)保存。

  当受试者开始回输,就一定要备份充足IL-6的试剂盒。结果需要3日,出具后第一时间发给研究者。我的项目是受试者渡过回输期后,主要随访期就不会再测IL-6水平。

  了解“CRS反应”,这有一个传送门:
  http://app.house086.com/mag/circle/v1/forum/threadWapPage?tid=136969&fid=37

  免疫球蛋白:carT攻击恶性克隆性细胞通常会影响(抑制)自身免疫功能,尤其是骨髓瘤受试者,恶性肿瘤组织学来源是B细胞,抑制B细胞则,受试者正常的免疫球蛋白分泌减少,表现在受试者血液免疫球蛋白水平均在20g/L水平线上下(参考值:20-40),对于发生低免疫球蛋白血症的AE,研究者将会考虑使用球蛋白类药物。(样本要求2-8度保存)

  肿瘤指标:疗效评估的指标。对于多发性骨髓瘤(MM)就是指血M蛋白定性,定量测定。

  随访开始提前确认流程,准备包括(不限于以下物品):
  1、生物样本申请单
  2、生物样本运输单
  3、生物样本采集记录表
  4、生物样本试剂盒及分装管
  5、冰箱门钥匙及冰箱钥匙
  6、防湿袋及绒布

  随访尿样:用于疗效评估。

  骨髓瘤受试者采集尿样比较特殊,需要采集24h尿样。计量并分装尿样,一般取33ml,(3-4管),寄送。

  寄送的血样一般采集30ml(7-9管),骨髓液(1-2管)一般寄送至外地指定实验室,报告可通过实验室网站查询,以明确本次疗效评估的结果和安全性的评估结果。

  以上内容是CART治疗多发性骨髓瘤项目生物样本的相关经验,有错误之处欢迎大家指出,且不同的CART项目肯定也有区别,仅以此文跟大家共同学习~

思途企业咨询

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